探針合成實驗服務
探針是- -小段單鏈DNA或者RNA的片段(大約是20到500 bp)， 用于檢測與其互補的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈，隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標記成為探針。
實驗材料 | 基因
|
試劑、試 劑盒
| 轉錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇
|
儀器、耗 材
| 水溶鍋、離心機、培養(yǎng)箱、烘箱
|
實驗步驟 | 1.在一個含SP6. T3或T7啟動子的載體中，插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線 性。DNAL以酚/氨0仿抽提， 乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。 2.室溫配置如下反應混合液(總體積20μl) : (1) 4.0 ul 5x轉錄緩)沖液 (2) 0.2 ul 1 mol/ DTT (3) 60 U RNA酶抑制劑 (4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種 (5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA (6) 10.0μ ζ[35s] UTP (7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶 (8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。 3.在反應混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑，20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。 4.往反應混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉，取出1 ul測定其cpm/ul值。 5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇，置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀，晾干，需要的話可重復此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。
6.確定其cpm/μl值， 并計算摻入百分比，核糖核酸探針應于2~3天內使用。 (70%到90%的標記摻入，結果可得70~90 ng標記的RNA)
|
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!
其他實驗代做服務
ELISA試劑盒免費代測 | Western Blot
| 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
免疫組化 | CCK8檢測 | 熒光定量PCR | 動物模型服務 |
流式細胞檢測 | 細胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實驗 | microRNA 測序 |
動物實驗 | Taqman探針 | ATP/ADP檢測
| 石蠟/冰凍切片 |
定點突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長曲線的測定 | 藥理毒理動物實驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質免疫沉淀CHIP | 非標定量（Label-free）實驗 |
執(zhí)照.jpg)
